慢病毒(Lentivirus)是一类改造自人免疫缺陷病毒(HIV)的病毒载体,基因组为RNA,对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。 慢病毒基因组进入细胞后,在细胞浆中反转录为DNA,形成DNA整合前复合体,进入细胞核后,DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录成mRNA,回到细胞浆中,表达目的蛋白;或产生小RNA。慢病毒介导的基因表达或小RNA干扰作用持续且稳定,并随细胞基因组的分裂而分裂(图1)。
图1慢病毒作用机制
慢病毒与腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒载体相比,具有宿主范围广,免疫原性低,基因容量大,可以长期表达等特点。慢病毒主要用于难转染细胞的感染,稳转株的制备,神经系统的定位注射实验。难转染的细胞主要包括干细胞、免疫细胞(如DC细胞)、肿瘤细胞等,此外,慢病毒还可以感染仓鼠胚胎制备转基因动物。
慢病毒感染细胞时,由于细胞的来源、代数和细胞状态等因素的影响,MOI值在不同实验室也略有差异,下面我们提供公司部分细胞的慢病毒MOI感染参数,供实验参考(以下数据是细胞感染效率在80%细胞状态良好的情况下获得的):
表1 不同细胞的MOI值参考
细胞名称 | 细胞来源 | MOI值 |
A-375 | 人恶性黑色素瘤细胞 | 10 |
A549 | 人肺腺癌细胞 | 10 |
PANC-1 | 人胰腺癌细胞 | 10 |
NCI-H1299 | 人肺腺癌细胞 | 10 |
Saos-2 | 人骨肉瘤细胞 | 10 |
MDA-MB-231 | 人乳腺癌细胞 | 40 |
SW620 | 人结肠癌细胞 | 40 |
T24 | 人膀胱癌细胞 | 20 |
Ca Ski | 人宫颈癌肠转移细胞 | 10 |
MG-63 | 人骨肉瘤细胞 | 50 |
和元生物慢病毒的生产和质控采取了国际学术界公认的标准流程,采用三质粒系统在293T细胞中进行包装。所获得的病毒颗粒经过超速离心纯化,并通过qPCR对病毒基因拷贝进行滴定。一般情况下我们的慢病毒的滴度在108~109TU/ml,完全可以满足各类实验的使用要求。
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